微生物操作中常见问题的讨论与分析

1、 划线获得单个菌落的方法。划不出单个菌落的原因：

(1) 平板上有过多的水分；

(2) 划线时接种环未经反复灼烧；

(3) 多区划线，三区或四区划线。

2、 涂布和倾注的区别：

涂布利于观察，但由于涂布棒上会带有少量的菌液，可能影响计数的准确性；倾注更为准确，但不利于观察菌落的状态。

3、 培养基配制时应注意的问题：

(1)灭菌温度要严格控制，按照要求灭菌，尤其含糖量较高的培养基温度不应太高，过高会导致糖分焦化，影响质量；

(2)琼脂培养基不能反复溶化。反复溶化会破坏培养基中的营养成分；

(3)培养基不能反复灭菌，反复灭菌也会导致营养成分的破坏；

(4)含琼脂的培养基灭菌后，要摇匀。

4、 平板的保存：

大多数平板如 VRBA、DC、尿素酶生化管、显色系列等要避光低温保存。

5、 产品的保存：

(1) 干粉培养基：避光干燥，结块后不能使用。

(2) 亚碲酸钾卵黄增菌液、50%卵黄乳液等：冷冻保存，使用时，要常温解冻，避免水浴加热。

(3) 抗生素类：冷藏保存，温度过高会导致灵敏度的下降。

(4) 兔血浆：冷藏保存少量的红色不会影响结果。

6、 观察时间的掌握：

按 SN、GB 等标准或培养基的使用说明所述时间进行观察，时间过短或时间过长，单菌落的特征都不会很明显。如单增李斯特氏菌显色培养基，时间短单菌落看不到卵磷/脂环，时间长绵羊李氏菌也会产生沉淀环。OXA、PALCAM的观察也如此，时间过长，李氏菌使整个平板成黑色，不利于观察单个菌落。

7、 添加剂的添加：

(1)温度的掌握。卵黄和抗生素类添加的温度都不应太高。

(2)定量。过多会抑制一些目标菌，太少又导致杂菌的过度生长。

8、 培养温度的掌握：

(1)真菌类。25-28℃培养

(2)细菌类。李氏菌在增菌和生化中要求培养温度在 30℃左右。

(3)其他一般在 36℃左右。

9、 接种方法：

常用的方法主要有划线、三点接种、穿刺接种、倾注接种、涂布接种、液体接种。

10、革兰氏染色方法：

染色时间的掌握、冲洗的方法。

11、生化实验：

(1)接种的方法

(2)氧化型和发酵型实验操作

(3)阳性菌种的对照

(4)接种前的纯化。挑取单个菌落进行一系列的生化。

12、关于杀菌的几个概念：

(1)抑制：是在亚抑制剂量因子作用下导致微生物生长停止，但在移去这些因子后生长仍可以恢复的生物学现象。

(2)死亡：在致死剂量因子的作用下或在亚致死剂量因子长时间的作用下，导致微生物生长能力不可逆丧失，即使移去这种因子后生长仍不能恢复的生物学现象。

(3)防腐：在某些化学物质或物理因子作用下，能防止或抑制微生物生长的一种措施，它能防止食物腐/败或防止食物霉变。

(4)消毒：利用某种方法杀死或灭活物质或物体中所有/病原微生物的一种措施，它可以起到防止感染和传播的作用。

(5)灭菌：利用某种方法杀死物体中包括芽孢在内的所有/病原微生物的一种措施。