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用人血清进行噬菌体ElISA吗?
点击次数:1207 更新时间:2015-11-19

用人血清进行噬菌体ElISA吗?您可知!下面就是上海远慕生物技术人员的简单解说:

[器材和试剂]
● 包被缓冲液
● PBST
● PBBST[PBS,1%TritonX—100,3% BSA(Sigma)]
● 兔抗人Fc—特异性IgG(Pierce):用包 被缓冲液稀释为5.0ug/ml①
● HRP标记的抗噬菌体抗体(Amersham Biosciences):用封闭液以1/10000比例 稀释
● 显色液[3,3’,5,5’—四甲基联苯胺 (TMB)液体底物系统,Sigma]

[方法]
1.将200ul兔抗人Fc—特异性IgG等量分加到各孔中。4℃孵育过夜。
2.用PBST洗涤多孔板。
3.加250ul PBBST。37℃孵育2小时。
4.弃去PBBST,将200ul噬菌体上清等量加入各孔。每孔中加入0.25ul血清,37℃振 荡孵育60分钟。
5,用PBST洗涤板孔。
6.加200gl HRP标记的羊抗噬菌体抗体。37℃振荡孵育30分钟。
7.用PBST洗涤板孔。
8.每孔中加200ul显色液。室温避光孵育15分钟。加25ul 2mol/L H2S04终止反应。分 析前在酶标仪中振荡10秒。
9.用自动酶标仪将A405和A655间的差值作为结果记录。

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